Perfil inflamatório e microbiológico de pacientes com infecção endodôntica primária e periodontite apical: estudo observacional / Inflammatory and microbiological profile of patients with primary endodontic infection and apical periodontitis: observational study

O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil microbiológico e identificar padrões de agregação bacteriana, avaliar a associação desses padrões com os níveis de mediadores inflamatórios, MMPs e sinais e sintomas clínicos e ainda correlacionar os mediadores inflamatórios entre si e com os sinais e sintomas clínicos em dentes com infecção endodôntica primária e periodontite apical (PA). Para isso, 40 dentes uniradiculares, de pacientes com infecção endodôntica primária e PA, foram submetidos à avaliação clínica, com registro de sinais e sintomas, e tomográfica através do cálculo de volumetria das lesões periapicais com o software ITK Snap. Em seguida os dentes foram submetidos ao tratamento endodôntico. Logo após a abertura coronária, amostras foram coletadas de cada canal radicular utilizando cones de papel (S1) e submetidas ao método Checkerboard DNA-DNA hybridization para investigação de espécies bacterianas presentes. Foi realizado o preparo biomecânico (PBM) e em seguida o fluído intersticial da PA foi coletado (SF1) para a quantificação dos mediadores inflamatórios (IL1-ß, IL-6, TNF-α, IL-10, MMPs -2 e -9) através do ensaio multiplex e a quantificação de RvD2 através de ensaio imunoenzimático ELISA. Para a análise de correlação o teste de correlação de Spearman foi utilizado. A análise fatorial foi usada para identificar padrões de agregação bacteriana e regressão linear foi realizada para associar os escores fatoriais, mediadores e características clínicas dos pacientes (P=0,05). Correlação positiva foi encontrada entre MMP-2, -9, IL-10, IL-1ß, IL-6 e TNF-α, e entre RvD2, MMP-9, IL-10, IL-1ß, IL-6 e TNF-α (P<0,05), e correlação negativa foi encontrada entre IL-1ß e sensibilidade a percussão (P<0,05). A análise microbiológica revelou presença de DNA bacteriano em 100% das amostras analisadas com presença de pelo menos 2 das 40 espécies bacterianas investigadas (média = 24,62) por canal. As espécies mais frequentemente detectadas foram P. gingivalis, E. nodatum, F. nucleatum spp. vicentii, S. mitis, L. bucallis e A. actinomycetemcomitans. Das 6 espécies mais detectadas, 4 delas eram gram negativas, destacando o predomínio de gram-negativos das infecções endodônticas primárias com PA. A análise fatorial determinou 2 padrões de associação bacteriana e os resultados de regressão para o fator 1 revelaram uma associação com aumento de dor a percussão (coeficiente (coef) ß=0,788) e redução de dor a palpação (coefß=-0,753) e exsudato (coefß=- 0,479). Níveis mais altos de exsudato e menores de dor a palpação foram associados a bactérias do fator 2 (coefß=0,460 e -0,546, respectivamente). Concluímos que os mediadores inflamatórios formam uma rede inter-relacionada e que as periodontites apicais assintomáticas e sintomáticas tem uma etiologia bacteriana heterogênea e com combinações de espécies diferentes (AU)

The aim of this study was to evaluate the microbiological profile and identify patterns of bacterial aggregation, evaluate the association of these patterns with the levels of inflammatory mediators, MMPs and clinical signs and symptoms, and also correlate the inflammatory mediators with each other and with the clinical signs and symptoms in teeth with primary endodontic infection and apical periodontitis (AP). For this, 40 single-rooted teeth, from patients with primary endodontic infection and PA, were submitted to clinical evaluation, with registration of signs and symptoms, and tomography through the calculation of volumetry of periapical lesions with the ITK Snap software. Then the teeth were submitted to endodontic treatment. Immediately after the coronal opening, samples were collected from each root canal using paper cones (S1) and submitted to the Checkerboard DNA-DNA hybridization method to investigate bacterial species present. Biomechanical preparation (BMP) was performed and then the AP interstitial fluid was collected (SF1) for the quantification of inflammatory mediators (IL1-ß, IL-6, TNF-α, IL-10, MMPs -2 and -9) by the multiplex assay and the quantification of RvD2 by enzyme immunoassay ELISA. For correlation analysis, Spearman's correlation test was used. Factor analysis was used to identify bacterial aggregation patterns and linear regression was performed to associate factor scores, mediators and patients' clinical characteristics (P=0.05). Positive correlation was found between MMP-2, -9, IL-10, IL-1ß, IL-6 and TNF-α, and between RvD2, MMP-9, IL-10, IL-1ß, IL-6 and TNF- α (P<0.05), and a negative correlation was found between IL-1ß and sensitivity to percussion (P<0.05). The microbiological analysis revealed the presence of bacterial DNA in 100% of the samples analyzed with the presence of at least 2 of the 40 bacterial species investigated (mean = 24.62) per root canal. The most frequently detected species were P. gingivalis, E. nodatum, F. nucleatum spp. vicentii, S. mitis, L. buccallis and A. actinomycetemcomitans. Of the 6 most detected species, 4 of them were gram negative, highlighting the predominance of gram-negative primary endodontic infections with AP. Factor analysis determined 2 patterns of bacterial association and regression results for factor 1 revealed an association with increased pain on percussion (coefficient (coef) ß=0.788) and reduced pain on palpation (coefß=-0.753) and exudate (coefß=-0.479). Higher levels of exudate and lower levels of pain on palpation were associated with factor 2 bacteria (coefß=0.460 and -0.546, respectively). We conclude that inflammatory mediators form an interrelated network and that asymptomatic and symptomatic apical periodontitis has a heterogeneous bacterial etiology and combinations of different species (AU)

Análise in vitro da capacidade de soluções contendo fluoreto e/ou trimetafosfato na remineralização da dentina e na inibição da atividade de metaloproteinases da matriz dentinária / In vitro analysis of the capacity of solutions containing fluoride and/or trimetaphosphate in the remineralization of dentin and in the inhibition of the activity of dentin matrix metalloproteinases

Objetivo: O objetivo deste estudo foi investigar o potencial anti-proteolítico contra MMP-2 e MMP-9 e a capacidade de induzir a remineralização da dentina, através de soluções contendo diferentes concentrações de TMP (na sua forma cíclica), diferentes concentrações de F e associação TMP/F. Métodos: Blocos de dentina radicular (6mmx4mmx2mm, n = 130) foram selecionados e divididos aleatoriamente em 13 grupos/soluções experimentais (n = 10): 1) Placebo (sem F/TMP); 2) 0,3% TMP hidrolisado; 3) 1% TMP hidrolisado; 4) 3% TMP hidrolisado; 5) 0,3% TMP; 6) 1% TMP; 7) 3% TMP; 8) 250 ppm F; 9 500 ppm F; 10) 1100 ppm F; 11) 250 ppm F associado a 0,3% TMP; 12) 500 ppm F associado a 1% TMP e 13) 1100 ppm F associado a 3% TMP. A avaliação do potencial anti-proteolítico das soluções experimentais contra as metaloproteinases da matriz dentinária (- 2 e -9) foi realizado por meio da análise zimográfica. Para as análises mecânicas, três áreas foram determinadas para cada espécime: 1- controle (sem tratamento); 2- desmineralizado (cárie artificial); 3- tratado (desmineralizado e submetido a ciclagem de pH por 7 dias, e tratado por 1 min com as soluções experimentais). Os espécimes de dentina foram analisados quanto à porcentagem de recuperação de dureza superficial (%SHR), em dureza transversal (%CSHR) e por microtomografia computadorizada (IMC). Para os dados de dureza e Micro-CT, os resultados foram analisados por ANOVA de medidas repetidas seguida do teste de Student-Newman-Keuls (p <0,05). Resultados: A análise zimográfica mostrou que 1100 ppm F + 3% de TMP promoveu inibição completa da atividade gelatinolítica (MMP-2; MMP-9). Os grupos com TMP não hidrolisados apresentaram efeito remineralizador (% SHR e % CSHR) superior aos grupos hidrolisados. O grupo 1100F + TMP promoveu a maior %SHR e %CSHR entre todos os grupos (p <0,001), sendo respectivamente 15,4 e 10,5%, superior ao grupo 1100F. Os grupos contendo 1100F e 1100F + 3%TMP apresentaram maior concentração mineral. Conclusão: Com base nos resultados, 3% TMP atua como um agente antiproteolítico contra metaloproteinases da matriz dentinária. Além disso, quando suplementado com 1100F, 3% TMP potencializa a remineralização, aumentando significativamente as propriedades mecânicas da dentina tratada. Os tratamentos com TMP não hidrolisado e associado ao F maior que as soluções fluoretadas sem o TMP. Significância clínica: Dessa forma, uma potencial estratégia preventiva e terapêutica pode ser considerada na clínica odontológica, principalmente na terapia da cárie radicular, como também para método preventivo de lesões iniciais de cárie dentinária ou no pré-tratamento da dentina, utilizando-os como agentes cross-linker em procedimentos restauradores(AU)

Objective: The aim of this study was to investigate the anti-proteolytic potential against MMP-2 and MMP-9 and the ability to induce dentin remineralization, through solutions containing different concentrations of TMP (in its cyclic form), different concentrations of F and TMP / F association. Methods: Root dentin blocks (6mmx4mmx2mm, n = 130) were selected and randomly divided into 13 groups / experimental solutions (n = 10): 1) Placebo (without F / TMP); 2) 0.3% hydrolyzed TMP; 3) 1% hydrolyzed TMP; 4) 3% hydrolyzed TMP; 5) 0.3% TMP; 6) 1% TMP; 7) 3% TMP; 8) 250 ppm F; 9,500 ppm F; 10) 1100 ppm F; 11) 250 ppm F associated with 0.3% TMP; 12) 500 ppm F associated with 1% TMP and 13) 1100 ppm F associated with 3% TMP. The evaluation of the antiproteolytic potential of experimental solutions against dentin matrix metalloproteinases (- 2 and -9) was carried out by means of zymographic analysis. For mechanical analysis, three areas were determined for each specimen: 1- control (without treatment); 2- demineralized (artificial caries); 3- treated (demineralized and subjected to pH cycling for 7 days, and treated for 1 min with the experimental solutions). The dentin specimens were analyzed for the percentage of recovery of superficial hardness (% SHR), in crosssectional hardness (% CSHR) and by computed microtomography (∆IMC). For the hardness and Micro-CT data, the results were analyzed by repeated measures ANOVA followed by the Student-Newman-Keuls test (p <0.05). Results: The zymographic analysis showed that 1100 ppm F + 3% TMP promoted complete inhibition of gelatinolytic activity (MMP-2; MMP-9). The groups with non-hydrolyzed TMP showed a remineralizing effect (% SHR and % CSHR) superior to the hydrolyzed groups. The 1100F + TMP group promoted the highest % SHR and % CSHR among all groups (p <0.001), being 15.4 and 10.5%, respectively, higher than the 1100F group. The groups containing 1100F and 1100F + 3% TMP showed higher mineral concentration. Conclusion: Based on the results, 3% TMP acts as an antiproteolytic agent against dentinal matrix metalloproteinases. In addition, when supplemented with 1100F, 3% TMP enhances remineralization, significantly increasing the mechanical properties of the treated dentin. Treatments with non-hydrolyzed TMP and associated with F greater than fluoridated solutions without TMP. Clinical significance: Thus, a potential preventive and therapeutic strategy can be considered in the dental clinic, mainly in the treatment of root caries, as well as for the preventive method of initial lesions of dental caries or in the pretreatment of dentin, using them as agents cross-linker in restorative procedures(AU)

Influência de inibidores de metaloproteinases na degradação da camada híbrida / Influence of metalloproteinase inhibitors on hybrid layer degradation

Objetivo: realizar uma revisão de literatura acerca da eficácia de utilização da clorexidina (CHX) e de outros tipos de inibidores de metaloproteinases (MMPs) na resistência de união da camada híbrida. Métodos: a busca bibliográfica foi realizada na base de dados PubMed, nos meses de novembro e dezembro de 2018. A pesquisa ocorreu em três fases, com os descritores previamente selecionados. Foram incluídas publicações dos últimos 10 anos no formato de pesquisas científicas realizadas in vitro ou in vivo. Após análise, obedecendo aos critérios de inclusão e exclusão, foram incluídos sete estudos na presente revisão. Resultados/Revisão de literatura: na interface adesiva, os estudos mostram que as MMPs são ativadas durante a etapa de ataque ácido realizada nos protocolos de aplicação de sistemas adesivos, podendo ser ativada tanto por procedimentos adesivos com condicionamento ácido prévio como por sistemas adesivos autocondicionantes. Além da CHX, outras substâncias foram pesquisadas e se mostraram eficazes na inibição de MMPs. Considerações finais: por meio da inibição da atividade das MMPs, é possível obter uma maior durabilidade da interface adesiva e uma menor degradação hidrolítica do colágeno presente na camada híbrida. (AU)

Objective: to perform a literature review on the efficacy of chlorhexidine (CHX) and other types of metalloproteinase inhibitors (MMPs) on hybrid layer bond strength. Methods: the bibliographic search was performed in PubMed, in the months of november and december of 2018. The research was carried out in three phases with the previously selected descriptors. Publications have been included in the last 10 years in the form of scientific research conducted in vitro or in vivo. After analysis, following the inclusion and exclusion criteria, 7 studies were included in the present review. Results / Literature review: in the adhesive interface, the studies show that the MMPs are activated during the acid attack stage carried out in the application protocols of adhesive systems, and can be activated either by adhesive procedures with prior acid conditioning or self-etching adhesive systems. In addition to CHX, other substances were investigated and shown to be effective in inhibiting MMPs. Final considerations: through the inhibition of the MMPs activity it is possible to obtain a greater durability of the adhesive interface and lower hydrolytic degradation of the collagen present in the hybrid layer. (AU)

Sistema adesivo universal: análise da interface adesiva e degradação colagenolítica em dentina submetida à diferentes protocolos de condicionamento ácido / Universal adhesive system: analysis of adhesive interface and collagenolytic degradation of demineralized dentin submitted to different acid etching ptotocols

O objetivo desse estudo foi analisar a interface adesiva do sistema adesivo Single Bond Universal (SBU) em dentina submetida à diferentes protocolos de condicionamento ácido em 24 h e 12 meses. E a degradação colagenolítica (DC) mediada por metaloproteinases (MMPs) e Catepsina-K (CAT-K) em tempo imediato. Esse estudo foi conduzido em 3 etapas: 1) Caracterização química da dentina em FTIR; 2) DC por meio de fragmentos do Telelopeptídeo Carboxiterminal do Colágeno Tipo I (ICTP) e do Terminal C do Telopeptídeo ligado ao Colágeno Tipo I (CTX) e a resistência à tração (RT) da do colágeno; 3) Análise da interface adesiva através da resistência de união (RU), análise de fratura, microscopia eletrônica de varredura (MEV) e nanoinfiltração (NI). Para FTIR foram utilizados 6 discos de dentina, divididos em 2 grupos: 1) Ácido fosfórico 32 %15 s (AF), 2) Ácido poliacrílico 25 % 10 s (AP). Para análise da DC, 12 discos de dentina foram completamente desmineralizados e divididos em 3 grupos: 1) AF, 2) AP e 3) Água deionizada (Controle) 15 s. Após, foram incubados e armazenados por 1 semana. Seguindo-se a análise da concentração de proteína total (PT). 50 µl da solução de incubação foram utilizadas para analisar ICTP e CTX. As concentrações foram calculadas em relação à PT. Para RT, foram testados 36 palitos obtidos dos discos de colágeno. Para RU foram utilizados 48 dentes, divididos em 2 grupos, de acordo com o período de armazenamento, divididos em três subgrupos: 1) AF, 2) AP e 3) Autocondicionante SBU 20 s (SE). Os dentes foram restaurados e armazenados em água destilada 37 °C. Após, foram submetidos ao teste de microtração e análise de fraturas. Para as análises MEV e NI foram utilizados 2 espécimes de cada subgrupo. Para análise estatística utilizou-se ANOVA 1-Fator, ANOVA- 2 Fatores e teste de Tukey (α=0.05). Para FTIR, AF reduziu a quantidade de fosfato e carbonato quando comparado ao AP. Para DC, a liberação de ICTPPT para AF foi significantemente maior do que para AP (p < 0,05). Não houve diferença na liberação de CTXPT para AF e AP (p > 0,05). Para RT não houve diferença entre AP e Controle, porém, apresentaram valores maiores do que AF (p<0,05). Para RU em MPa, não houve diferença estatisticamente significativa para todos os tratamentos nos diferentes períodos de análise (p < 0,05). A análise de fraturas evidenciou a predominância de fraturas adesivas e mistas. MEV mostrou melhor qualidade da interface após 12 meses para AF e AP. Após 12 meses apenas SE não apresentou NI. Assim sendo, o autocondicionamento ainda parece ser a melhor opção para sistemas adesivos universais que possuam monômeros funcionais em sua composição.(AU)

The aim of this study was to analyze the adhesive interface of the Single Bond Universal (SBU) to dentin submitted to different acid etching protocols in 24 h and 12 months, and the collagenolytic degradation (CD) by matrix metalloproteinases (MMPs) and Cathepsin-K (CAT-K) in the immediate time. This study was divided into three stages: 1) Dentin chemical characterization by FTIR; 2) CD by release of the collagen telopeptide fragment cross-linked carboxyterminal telopeptide of type I collagen (ICTP), and C-terminal crosslinked telopeptide of type I collagen (CTX) and ultimate tensile strength (UTS); 3) Analysis of the adhesive interface by microtensile bond strength (µTBS), failure mode, scanning electron microscopy (SEM) of the AI, and nanoleakage by SEM (NL). For FTIR, six dentin disks were divided into two groups: 1) Phosphoric acid 15 s (PA), 2) Polyacrylic acid 10 s (PAA). For CD twelve dentin disks were completely demineralized, then were divided into 3 groups 1) PA, 2) PAA, and 3) deionized water (Control) for 15 s. All disks were incubated in a buffered solution (BS) for 1 week. Total protein (TP) concentrations were measured using Nanodrop™ at 280 nm. 50 µl of BS was used to analyze solubilized telopeptide fragments using ICTP and CTX . ICTP and CTX average ratios were calculated in relation to TP concentration (ICTPtp and CTXtp). For UTS, 36 dentin beams obtained from collagen disks were tested. For µTBS, forty-eight teeth were divided into two groups according to the period of storage, then subdivided into three subgroups: 1) PA, 2) PAA, and 3) Self-etch 20 s (SE). After, composite build up, the specimens were stored in distilled water at 37 °C. Two specimens of each group were used for SEM analysis of AI and NL. Data were analyzed by one-way ANOVA, two-way ANOVA and Tukey tests (p<0.05). According to the results of the FTIR etching with PA reduced the amount of phosphate and carbonate when compared to PAA. ICTPtp release of PA was significantly higher A than PAA (p > 0,05). CTXtp showed no difference between the PA and PAA (p < 0,05). For UTS there was no difference between PAA and control, but they were significantly higher (p<0.05) than PA. For µTBS in MPa, there is no statistical difference among all the etching protocols tested, as well in both storage periods of analysis (p < 0,05). The most prevalent failure mode were adhesives associated with mixed. SEM analysis highlighted a better quality of AI after 12 months for PA and PAA. However, after 12 months only SE did not show NL. Then, the self-etching protocol seems to be a better choice regarding universal adhesive systems which have functional monomers in their blend(AU)

Zinc and metalloproteinases 2 and 9: What is their relation with breast cancer? / Zinco e metaloproteinases 2 e 9: qual é a relação com câncer de mama?

Summary Zinc is the catalytic component of proteins that regulate responses to DNA damage, intracellular signaling enzymes, and matrix metalloproteinases, which are important proteins in carcinogenesis. The objective of this review is to bring current information on the participation of zinc and matrix metalloproteinases types 2 and 9 in mechanisms involved in the pathogenesis of breast cancer. We conducted a literature review, in consultation with the PubMed, Lilacs, and Scielo databases. The zinc and cysteine residues are structural elements shared by all members of the family of matrix metalloproteinases, and these proteins appear to be involved in the propagation of various types of neoplasms, including breast cancer. Moreover, transported zinc is likely to be used for the metalation of the catalytic domain of the newly synthesized metalloproteinases before the latter are secreted. Accordingly, increase in zinc concentrations in cellular compartments and the reduction of this trace element in the blood of patients with breast cancer appear to alter the activity of metalloproteinases 2 and 9, contributing to the occurrence of malignancy. Thus, it is necessary to carry out further studies with a view to clarify the role of zinc and metalloproteinases 2 and 9 in the pathogenesis of breast cancer.

Resumo O zinco é componente catalítico de proteínas que regulam respostas a danos no DNA, enzimas de sinalização intracelular e metaloproteinases de matriz, proteínas importantes na carcinogênese. O objetivo desta revisão é trazer informações atualizadas sobre a participação do zinco e das metaloproteinases de matriz dos tipos 2 e 9 em mecanismos envolvidos na patogênese do câncer de mama. Realizou-se um levantamento bibliográfico, mediante consulta às bases de dados PubMed, Scielo e Lilacs. O zinco e os resíduos de cisteína são elementos estruturais compartilhados por todos os membros da família das metaloproteinases de matriz, as quais parecem estar envolvidas na propagação de vários tipos de neoplasias, incluindo o câncer de mama. Além disso, é provável que o zinco transportado seja utilizado para metalação do domínio catalítico das metaloproteinases recentemente sintetizadas antes de serem segregadas. Nesse sentido, o aumento das concentrações de zinco em compartimentos celulares e a redução desse oligoelemento no sangue de pacientes com câncer de mama parecem alterar a atividade das metaloproteinases 2 e 9, contribuindo para a ocorrência de tumor maligno. Assim, faz-se necessária a realização de novos estudos na perspectiva de esclarecer o papel do zinco e das metaloproteinases 2 e 9 na patogênese do câncer de mama.

The use of sodium trimetaphosphate for matrix metalloproteinase inhibition, remineralization and bonding to dentin / O uso de trimetafosfato de sódio sobre a inibição de metaloproteinases e na remineralização e adesão à dentina

The adhesive process to dentin substrate depends on the condition determined by the combined action of the mineral loss and the endogenous enzymes activity. Thus, considering a more complete therapeutic approach, sodium trimetaphosphate (STMP) may be a novel strategy that conciliates the remineralization potential to the promotion of dentin strengthening and its stability, possibly directing mineral nucleation and controlling the rate of biodegradation. In this study, the effect of STMP was evaluated in 2 studies. In study 1, different concentrations of STMP (0.5, 1.5, 3.5 and 5%) were investigated to assess their anti-proteolytic capacity on human purified MMPs-2 and -9 by zymography. Afterwards, only the concentrations (1.5, 3.5 and 5%) that showed total inhibition of both MMPs were used to evaluate their remineralizing capacity in dentin substrate submitted to artificial cariogenic challenge, through surface hardness (SH) and cross-sectional hardness (CSH). In study 2, based on the previous results, the capacity of the 1.5% STMP associated or not with NaF or Ca(OH)2 solutions in improving the dentin bond strength of a universal adhesive system was evaluated by the microtensile test . Thus, these studies suggest that 1.5% STMP is an effective inhibitor of collagen degradation mediated by purified human MMPs-2 and -9. In addition, demineralized and treated dentin with 1.5% STMP supplemented with Ca(OH)2 may induce remineralization. Thus, the use of STMP can be introduced as a new strategy that combines enzymatic inhibition and remineralization potential, reestablishing favorable conditions to affected dentin. These evidences support perspectives of therapies to restructure dentin and propose feasible and promising clinical strategies.(AU)

O processo adesivo ao substrato dentinário depende da condição determinada pela ação combinada da perda mineral e atividade de enzimas endógenas. Deste modo, considerando uma abordagem terapêutica mais completa, o trimetafosfato de sódio (STMP) pode ser uma estratégia inovadora que concilia o potencial remineralizador à promoção do fortalecimento da dentina e sua estabilidade, possivelmente direcionando a nucleação mineral e controlando a taxa de biodegradação. Neste trabalho, o efeito do STMP foi avaliado em 2 estudos. No estudo 1, diferentes concentrações de STMP (0,5; 1,5; 3,5 e 5%) foram investigadas para avaliar sua capacidade anti-proteolítica sobre as MMPs-2 e -9 purificadas humanas, por zimografia. Posteriormente, somente as concentrações (1,5; 3,5 e 5%) que apresentaram capacidade de inibição total de ambas MMPs foram utilizadas para avaliar sua capacidade remineralizadora em substrato dentinário submetido ao desafio cariogênico artificial, através da dureza de superfície (DS) e longitudinal (DL). No estudo 2, baseado nos resultados anteriores, foi avaliada a capacidade do STMP à 1,5% associado ou não a soluções de NaF ou Ca(OH)2 em melhorar a resistência de união à dentina de um sistema adesivo universal pelo teste de microtração. Desta forma, estes estudos sugerem que o STMP à 1,5% apresenta-se como um inibidor eficaz da degradação do colágeno mediada por MMPs-2 e -9 humanas purificadas. Além disso, a dentina humana desmineralizada e tratada com STMP à 1,5% suplementada com Ca(OH)2 pode induzir à remineralização. Assim, o uso de STMP pode ser introduzido como uma nova estratégia que combina inibição enzimática e potencial de remineralização, reestabelecendo condições favoráveis a partir de uma dentina afetada. Estas evidências sustentam perspectivas de terapias para reestruturar a dentina e propor estratégias clínicas factíveis e promissoras.(AU)

Papel das proteases na erosão dentinária / The role of proteases on dental erosion

Na dentina, a matriz orgânica desmineralizada tem um papel protetor contra desafios erosivos subsequentes. Porém, essa camada pode ser degradada por proteases, como as metaloproteinases da matriz (MMPs) e cisteína catepsinas (CCs). Recentemente, o uso de inibidores de proteases da matriz surgiu como uma importante ferramenta preventiva contra a erosão dentinária. Entretanto, o(s) mecanismo(s) exato(s) pelo(s) qual(is) os inibidores de proteases podem prevenir a erosão dentinária, bem como os tipos de proteases mais envolvidas neste processo ainda não são completamente conhecidos. O projeto foi desenvolvido em 2 subprojetos, com os seguintes objetivos: A)Subprojeto 1:Avaliar o papel das proteases na progressão da erosão dentária; B)subprojeto 2: Testar o potencial inibitório do NaF em CCs dentinárias. Para cumprir esses objetivos, foram utilizadas dentina de terceiros molares humanos para a preparação dos espécimes. A)Subprojeto1:Blocos de dentina (4 X 4 x 2 mm) (n=119) foram obtidos de raízes. Os espécimes foram divididos em 7 grupos de acordo com o seu tratamento (E-64, inibidor especifico II de catepsinas B, clorexidina, galardina NaF, placebo) ou sem tratamento, géis foram aplicados uma única vez sobre a superfície e feito o desafio erosivo (90s, 4x por dia por 5 dias) e feita analise perfilométrica. Os espécimes foram incubadas em solução contendo colagenase de Clostridium histolyticum tipo VII por 96hrs e então feita uma segunda analise perfilometrica para se determinar a espessura da MOD. Dois espécimes foram separados para análise de microscopia eletrônica de varredura. B)Subprojeto 2: Palitos de dentina (6 mm X 2 mm X 1 mm) (n=60) foram cortados da porção médio coronária dos dentes e completamente desmineralizados por imersão em EDTA 0,5 M (pH7,4) por 30 dias e lavados em água deionizada sob constante agitação a 4ºC por 72 h. Os espécimes foram divididos em 6 grupos (E-64, NaF e controle negativo, pH 5,5 ou 7,2) e incubados em saliva artificial contendo seus respectivos inibidores por 24 h 7 dias e 21 dias; ao termino de cada período, os espécimes eram pesados para avaliar a perda de massa e analisada a presença de CTX. A)Subprojeto 1: a perda de tecido desmineralizado (m, média± SD) foi: CHX 8,4±1,7b, Gala 8,6±1,9b, IECB 9,6±1,4a, E64 9,9±1,3a, NaF 9,9±1,7a, P 10,9±2,2a, ST 11,0±1,5a. A perda de tecido mineralizado foi: CHX 15,4±2,2b, Gala 16,0±1,8b, IECB 17,6±2,4a, E64 17,6±2,0a, NaF 17,3±2,8a, P 19,1±2,1a, ST 18,9±2,4a. Os inibidores de MMP reduziu significativamente a perda de matriz orgânica e tecido mineralizado em comparação com os outros grupos (p<0,05). Não foi achada diferença significante entre a espessura da matriz orgânica desmineralizada remanescente (p=0,845). B)Subprojeto 2: Na perda de massa houve diferença significante em relação ao inibidor (F=20,047, p<0,0001) e tempo de incubação (F=222,462, p<0,0001) com significante interação entre esses critérios, nos período de menor tempo de incubação, a perda foi similar para todos os grupos testados, no período de maior tempo de incubação, o grupo contendo NaF demostrou os melhores resultados. Na analise de CTX, houve diferença significante em relação aos inibidores (F46,543, p<0,0001), pH (F=14,836, p<0,0004) e tempo de incubação (F=161,438, p<0,0001) com significante interação entre esses critérios, como ocorrido na perda de massa, não houve diferença estatística nos períodos de menor incubação. No período de maior tempo de incubação, mais uma vez o grupo NaF mostrou os melhores resultados. No valor acumulado de CTX, os grupos E64 e controle negativo tiveram os maiores valores de CTX acumulado, o grupo NaF, independente do pH mostrou redução significante em relação aos demais grupos. Após analise dos resultados dos dois subprojetos, podemos indicar que as MMPs são as proteases de maior importância na progressão da erosão dentinária, assim, sua inibição é de maior importância para a redução desta patologia. Mesmo as CCs não exercendo papel direto para a progressão da erosão, elas são efetivas na cascata da ativação de outras proteases, como as próprias MMPs. Com isso, sua inibição também pode ser importante para a redução indireta da progressão da erosão. Neste presente estudo, pudemos comprovar que o NaF tem potencial inibitório sobre as CCs dentinárias, assim, sugerindo um novo inbidor de CCs. Com os resultados deste estudo, podemos afirmar que as MMPs são as principais proteases na progressão da erosão dentinária e que o NaF tem potencial inibitório nas CCs dentinárias.(AU)

In the dentine, the demineralized organic matrix has a protector part against the following erosive challenges. Nevertheless, this layer can be degraded by proteases, like the matrix metalloproteinases (MMPS) and cystein cathepsins (CCs). Recently, the use of proteases of the matrix´s inhibitors, emerged as an important preventive tool against the dentinária erosion. However, the exact mechanisms from which the inhibitors of the proteases may prevent the dentin erosion, as much as the kinds of proteases more involved in this process are not completely known yet. Therefore, the general objective of this project was to investigate the part of the two main proteases of the matrix (MMPs and CCs) in the dental erosion. The project was developed in 2 subprojects, with the following objectives: A)Subproject 1: Evaluate the part of the proteases in the progression of the dental erosion; B)subproject 2: To test the NaF inhibitory potencial in the dentin CCs. To accomplish these objectives, human third molar dentin were used for the preparation of the specimens, obtained in the surgery and urgency clinics of FOB-USP (subproject 1) or granted by the University of Oulu (subproject 2). A) Subproject 1: Dentine blocks 4 X 4 X 2 mm) (n=119) were obtained from the roots of the obtained teeth. The specimens were divided in 7 groups according with their treatment. Gels containing inhibitors (E-64, specific cathepsin B inhibitor II, chlorhexidine, galardin NaF, placebo), or without treatment, were produced, applied only one time over the surface and made the erosive challenge (90s, 4x a day for 5 days) and made profilometric analysis. The specimens were incubated in a solution containing collagenase of Clostridium histolyticum type VII for 96 hours and then a second profilometric analysis was made to determine the thickness of the MOD. Two specimens were separated for the electronic microscopy scan analysis. B) Subproject 2: Dentine sticks (6 mm X 2 mm X 1 mm) (n=60) were cut from the medium coronary portion of the teeth and completely demineralized by immersion in EDTA 0,5 M (pH7,4) ifor 30 days and washed in deionized water under constant agitation in 4º C for 72 hours. The specimens were divided in 6 groups (divided by inhibitors: E-64, NaF and negative control, pH 5,5 or 7,2) and incubated in artificial saliva containing their respective inhibitors for 24 hours, 7 days and 21 days; by the end of each period, the specimens were weighted to evaluate the loss of mass and analised the presence of CTX. A)Subproject 1: the loss of demineralized tissue (m, média± SD) was : CHX 8,4±1,7b, Gala 8,6±1,9b, IECB 9,6±1,4a, E64 9,9±1,3a, NaF 9,9±1,7a, P 10,9±2,2a, ST 11,0±1,5a. The loss of demineralized tissue was: CHX 15,4±2,2b, Gala 16,0±1,8b, IECB 17,6±2,4a, E64 17,6±2,0a, NaF 17,3±2,8a, P 19,1±2,1a, ST 18,9±2,4a. The MMP inhibitors reduced significantly the loss of organic matrix and demineralized tissue in comparison with other groups (p<0,05). There was no significant difference found between the thickness of the remaining demineralized organic matrix.(p=0,845). B)Subproject: In the loss of mass, there was a significant difference in relation to the inhibitor (F=20,047, p<0,0001) and incubation time (F=222,462, p<0,0001) with significant interaction between these criteria, in the periods of lesser time of incubation, the loss was similar for all the tested groups, in the period of higher time of incubation, the group containing NaF demonstrated the best results. In the analysis of CTX, there was significant difference in relation the inhibitors (F46,543, p<0,0001), pH (F=14,836, p<0,0004) and time of incubation (F=161,438, p<0,0001)with significant interaction between these criteria, as occurred in the mass loss, there was no statistic difference in the period of lesser incubation. In the period of higher time of incubation, once again, the NaF group demonstrated the best results. The CTX accumulated value, the E64 groups and negative control had the greater accumulated values of CTX, the NaF group, regardlessof the pH, demonstrated significant reduction in relation to the other groups. After the analysisof the results of both subprojects, we can indicate that the MMPs are the proteases of greater importance in the progression of the dentin erosion, thus, its inhibition is of graeter importance for the reduction of this pathology. Even the CCs don´t playing the part directly for the progression of erosion, they are effective in the cascade of the activation of other proteases, like the MMPs themselves. In this manner, its inhibition can also be important for the indirect reduction of the progression of the erosion. In this present study, we can prove that the NaF has inhibiting potential over the dentin CCs, thus, suggesting a new inhibitor of CCs. With the results of this study, we can affirm that the MMPs are the main proteases in the progression of the dentin erosion and that the NaF has inhibiting potential in the dentin CCs.(AU)

18F-Fluorodeoxyglucose positron emission tomography and serum cytokines and matrix metalloproteinases in the assessment of disease activity in Takayasu's arteritis / Tomografia por emissão de pósitrons com 18F-fluordesoxiglicose e citocinas séricas e metaloproteinases da matriz na avaliação da atividade da doença na arterite de Takayasu

ABSTRACT Objective: To evaluate 18F-fluorodeoxyglucose (18F-FDG) uptake on positron emission tomography–computed tomography (PET–CT) and serum levels of different cytokines and matrix metalloproteinases (MMPs) in patients with Takayasu arteritis (TA) and associations with disease activity. Methods: Serum levels of tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin (IL)-2, IL-6, IL-8, IL-12, IL-18, MMP-3 and MMP-9 were measured in 36 TA patients and 36 controls. Maximum standard uptake value (SUVmax) of 18F-FDG in arterial walls was determined by PET–CT scans. TA patients were classified as active disease, inactive disease and possible active disease. Results: Serum IL-6 and MMP-3 levels were higher in TA patients than in controls (p < 0.001). Serum IL-6 was higher in patients with active disease and in patients with possible active disease than in inactive disease (p < 0.0001). Patients with active disease had higher serum TNFα levels than patients with inactive disease (p = 0.049) while patients with possible active disease presented higher IL-18 levels than patients with inactive disease (p = 0.046). Patients with active disease had higher SUVmax values than those with inactive disease (p = 0.042). By receiver operating characteristic (ROC) curve SUVmax was predictive of active disease in TA and values ≥1.3 were associated with disease activity (p = 0.039). Serum TNF-α levels were higher in patients with SUVmax ≥ 1.3 than <1.3 (p = 0.045) and controls (p = 0.012). Serum IL-6 levels were higher in patients with SUVmax ≥ 1.3 than in controls (p < 0.001). No differences regarding other biomarkers were found between TA patients and controls. Conclusions: Higher serum IL-6 and TNFα levels as well as higher 18F-FDG uptake in arterial wall are associated with active TA.

RESUMO Objetivo: Avaliar a captação de 18F-fluordesoxiglicose (FDG) na tomografia por emissão de pósitrons – tomografia computadorizada (PET-CT) – e os níveis séricos de diferentes citocinas e da metaloproteinases da matriz (MMP) em pacientes com arterite de Takayasu (AT) e associações com a atividade da doença. Métodos: Foram mensurados os níveis séricos do fator de necrose tumoral-α (TNF-α), interleucina (IL)-2, IL-6, IL-8, IL-12, IL-18, MMP-3 e MMP-9 em 36 pacientes com AT e 36 controles. O valor padronizado de captação máximo (SUVmax) de 18F-FDG nas paredes arteriais foi determinado por exames de PET-CT. Os pacientes com AT foram classificados como doença ativa, doença inativa e possível doença ativa. Resultados: Os níveis séricos de IL-6 e MMP-3 foram mais altos em pacientes com AT do que nos controles (p < 0,001). Os níveis séricos de IL-6 foram mais elevados em pacientes com doença ativa e em pacientes com possível doença ativa do que naqueles com doença inativa (p < 0,0001). Os pacientes com doença ativa apresentaram níveis séricos mais elevados de TNF-α do que os pacientes com doença inativa (p = 0,049), enquanto os indivíduos com possível doença ativa apresentaram maiores níveis séricos de IL-18 do que os pacientes com doença inativa (p = 0,046). Aqueles com doença ativa apresentaram maiores valores de SUVmax do que aqueles com doença inativa (p = 0,042). De acordo com a curva ROC, o SUVmax foi capaz de predizer a doença ativa na AT e valores ≥ 1,3 estavam associados à atividade da doença (p = 0,039). Os níveis séricos de TNF-α foram maiores em pacientes com SUVmax ≥ 1,3 do que naqueles com valor < 1,3 (p = 0,045) e controles (p = 0,012). Os níveis séricos de IL-6 foram mais elevados em pacientes com SUVmax ≥ 1,3 do que nos controles (p < 0,001). Não foram encontradas diferenças em relação a outros biomarcadores entre pacientes com AT e controles. Conclusões: Níveis séricos elevados de IL-6 e TNF-α, bem como uma maior captação arterial de 18F-FDG, estão associados à AT ativa.

Influência de soluções de clorexidina e de própolis e da simulação de pressão pulpar na resistência de união dentinária / Influence of chlorhexidine and propolis solutions and simulated pulpal pressure in dentin bond strength

O objetivo deste estudo foi avaliar a influência de soluções de clorexidina e de própolis e da simulação de pressão pulpar na resistência de união entre resina e dentina. Para isto, foram obtidos segmentos coronários de 120 dentes humanos. Metade das amostras foram conectadas a um dispositivo de simulação de pressão pulpar, cujaaltura foi ajustada para 15 cm de água. Foi realizado condicionamento com ácidofosfórico 37% por 15 s, lavagem e secagem com papel absorvente. Em seguida, foram divididas em 3 grupos, de acordo com a solução aplicada por 30 s: GC(Grupo Controle – nenhuma solução), CLX (Digluconato de Clorexidina 0,2%), PA (Extrato de própolis aquoso). Aplicou-se o adesivo (Single Bond Universal) e resina composta (Filtek Z250) em todos as amostras. Os grupos foram subdivididos de acordo com o tipo de envelhecimento: I (Corte Imediato), C (15000 ciclos térmicos). As amostras foram cortadas em palitos e submetidas ao teste de microtração. Os dados obtidos de resistência de união (MPa) foram submetidos ao teste de ANOVA 3 fatores. Para o fator Solução, não foi encontrada diferença estatisticamente significante entre os grupos (p=0,46), mas sim para os fatores Pressão Pulpar (p=0,00) e Envelhecimento (p=0,00), além das interações entre os fatores Solução e Pressão Pulpar (p= 0,00),Pressão Pulpar e Envelhecimento (p=0,00) e entre os três fatores (p=0,03). Os resultados do teste de Tukey para o fator Pressão Pulpar foram: CPP (com pressão pulpar): 29,19a, SPP (sem pressão pulpar): 32,98b; e para o fator Envelhecimentoforam: C (ciclados): 28,12a, I (imediato): 34,05b. Concluiu-se que as soluções de clorexidina e de própolis não interferiram na resistência de união; e que a simulação de pressão pulpar e a termociclagem diminuíram os valores de resistência de união da resina à dentina.

This study aimed to assess the influence of chlorhexidine and propolis solutions andsimulated pulpal pressure on the bond strength between resin and dentin. To do so,crown segments of 120 human teeth were obtained. Half of the samples wereconnected to a pulp pressure simulation device, adjusted to 15 cm H2O. Conditioningwas accomplished with 37% phosphoric acid for 15 seconds, washing and drying withabsorbing paper. Then, samples were split into 3 groups, according to the solutionapplied for 30 s: GC (Control group – no solution), CLX (Chlorhexidine digluconate0.2%), PA (Aqueous propolis extract). Single Bond Universal adhesive and compositeresin (Filtek Z250) were applied in all samples. Groups were subdivided according tothe aging process: I (Immediate cut) and T (15000 thermal cycles). Samples were cutinto beams and went through microtensile bonding tests. Bond strength data (MPa)were analyzed by three-way ANOVA. For the factor Solution, there was no statisticallysignificant difference among the groups (p = 0.46), but was found difference for thefactors Pulpal Pressure (p=0.00), Aging (p=0.00), and interaction between Solutionand Pulpal Pressure (p=0.00), Pulpal Pressure and Aging (p=0.00) and between the 3factors (p=0.03). The results from Tukey’s test for Pulpal Pressure factor were: SPP(simulated pulpal pressure): 29,19a, NPP (no pulpal pressure): 32,98b; and for thefactor Aging were: T (thermal cycling): 28,12a, I (immediate): 34,05b. It was concludedthat chlorhexidine and propolis solutions have not interfered in the bond strength; butsimulated pulpal pressure and termal cycling reduced the dentin bond strength.

Influência de soluções de clorexidina e de própolis e da simulação de pressão pulpar na resistência de união dentinária / Influence of chlorhexidine and propolis solutions and simulated pulpal pressure in dentin bond strength

O objetivo deste estudo foi avaliar a influência de soluções de clorexidina e de própolis e da simulação de pressão pulpar na resistência de união entre resina e dentina. Para isto, foram obtidos segmentos coronários de 120 dentes humanos. Metade das amostras foram conectadas a um dispositivo de simulação de pressão pulpar, cujaaltura foi ajustada para 15 cm de água. Foi realizado condicionamento com ácidofosfórico 37% por 15 s, lavagem e secagem com papel absorvente. Em seguida, foram divididas em 3 grupos, de acordo com a solução aplicada por 30 s: GC(Grupo Controle – nenhuma solução), CLX (Digluconato de Clorexidina 0,2%), PA (Extrato de própolis aquoso). Aplicou-se o adesivo (Single Bond Universal) e resina composta (Filtek Z250) em todos as amostras. Os grupos foram subdivididos de acordo com o tipo de envelhecimento: I (Corte Imediato), C (15000 ciclos térmicos). As amostras foram cortadas em palitos e submetidas ao teste de microtração. Os dados obtidos de resistência de união (MPa) foram submetidos ao teste de ANOVA 3 fatores. Para o fator Solução, não foi encontrada diferença estatisticamente significante entre os grupos (p=0,46), mas sim para os fatores Pressão Pulpar (p=0,00) e Envelhecimento (p=0,00), além das interações entre os fatores Solução e Pressão Pulpar (p= 0,00),Pressão Pulpar e Envelhecimento (p=0,00) e entre os três fatores (p=0,03). Os resultados do teste de Tukey para o fator Pressão Pulpar foram: CPP (com pressão pulpar): 29,19a, SPP (sem pressão pulpar): 32,98b; e para o fator Envelhecimentoforam: C (ciclados): 28,12a, I (imediato): 34,05b. Concluiu-se que as soluções de clorexidina e de própolis não interferiram na resistência de união; e que a simulação de pressão pulpar e a termociclagem diminuíram os valores de resistência de união da resina à dentina

This study aimed to assess the influence of chlorhexidine and propolis solutions andsimulated pulpal pressure on the bond strength between resin and dentin. To do so,crown segments of 120 human teeth were obtained. Half of the samples wereconnected to a pulp pressure simulation device, adjusted to 15 cm H2O. Conditioningwas accomplished with 37% phosphoric acid for 15 seconds, washing and drying withabsorbing paper. Then, samples were split into 3 groups, according to the solutionapplied for 30 s: GC (Control group – no solution), CLX (Chlorhexidine digluconate0.2%), PA (Aqueous propolis extract). Single Bond Universal adhesive and compositeresin (Filtek Z250) were applied in all samples. Groups were subdivided according tothe aging process: I (Immediate cut) and T (15000 thermal cycles). Samples were cutinto beams and went through microtensile bonding tests. Bond strength data (MPa)were analyzed by three-way ANOVA. For the factor Solution, there was no statisticallysignificant difference among the groups (p = 0.46), but was found difference for thefactors Pulpal Pressure (p=0.00), Aging (p=0.00), and interaction between Solutionand Pulpal Pressure (p=0.00), Pulpal Pressure and Aging (p=0.00) and between the 3factors (p=0.03). The results from Tukey’s test for Pulpal Pressure factor were: SPP(simulated pulpal pressure): 29,19a, NPP (no pulpal pressure): 32,98b; and for thefactor Aging were: T (thermal cycling): 28,12a, I (immediate): 34,05b. It was concludedthat chlorhexidine and propolis solutions have not interfered in the bond strength; butsimulated pulpal pressure and termal cycling reduced the dentin bond strength

Hydrocortisone supresses inflammatory activity of metalloproteinase - 8 in carotid plaque / Hidrocortisona suprime a atividade inflamatória da metaloproteinase - 8 presente na placa carotídea

AbstractObjective:Matrix metalloproteinases are inflammatory biomarkers involved in carotid plaque instability. Our objective was to analyze the inflammatory activity of plasma and carotid plaque MMP-8 and MMP-9 after intravenous administration of hydrocortisone.Methods:The study included 22 patients with stenosis ≥ 70% in the carotid artery (11 symptomatic and 11 asymptomatic) who underwent carotid endarterectomy. The patients were divided into two groups: Control Group - hydrocortisone was not administered, and Group 1 - 500 mg intravenous hydrocortisone was administered during anesthetic induction. Plasma levels of MMP-8 and MMP-9 were measured preoperatively (24 hours before carotid endarterectomy) and at 1 hour, 6 hours and 24 hours after carotid endarterectomy. In carotid plaque, tissue levels of MMP-8 and MMP-9 were measured.Results:Group 1 showed increased serum levels of MMP- 8 (994.28 pg/ml and 408.54 pg/ml, respectively; P=0.045) and MMP-9 (106,656.34 and 42,807.69 respectively; P=0.014) at 1 hour after carotid endarterectomy compared to the control group. Symptomatic patients in Group 1 exhibited lower tissue concentration of MMP-8 in comparison to the control group (143.89 pg/ml and 1317.36 respectively; P=0.003). There was a correlation between preoperative MMP-9 levels and tissue concentrations of MMP-8 (P=0.042) and MMP-9 (P=0.019) between symptomatic patients in the control group.Conclusion:Hydrocortisone reduces the concentration of MMP- 8 in carotid plaque, especially in symptomatic patients. There was an association between systemic and tissue inflammation.

ResumoObjetivo:As metaloproteinases são biomarcadores inflamatórios envolvidos na instabilidade da placa carotídea. O objetivo deste estudo foi analisar a atividade inflamatória da MMP-8 e MMP-9 plasmática e presente na placa carotídea, após administração intravenosa de hidrocortisona.Métodos:Participaram do estudo 22 pacientes portadores de estenose ≥ 70% em artéria carótida (11 sintomáticos e 11 assintomáticos), submetidos à endarterectomia de artéria carótida. Os pacientes foram divididos em dois grupos: Grupo Controle - não foi administrado hidrocortisona e Grupo 1 - foi administrado 500 mg intravenoso de hidrocortisona durante a indução anestésica. As dosagens plasmáticas de MMP-8 e MMP-9 foram efetuadas no pré-operatório (24 horas antes da endarterectomia de artéria carótida) e em 1 hora, 6 horas e 24 horas após endarterectomia de artéria carótida. Na placa carotídea foram mensurados os níveis teciduais de MMP-8 e MMP-9.Resultados:O grupo 1 exibiu elevação dos níveis séricos da MMP-8 (994,28 pg/ml e 408,54 pg/ml, respectivamente; P=0.045) e MMP-9 (106.656,34 e 42.807,69, respectivamente; P=0.014) em 1 hora após a endarterectomia de artéria carótida, em relação ao grupo controle. Os pacientes sintomáticos do grupo 1 exibiram menor concentração tecidual de MMP-8, em relação ao grupo controle (143,89 pg/ml e 1317,36, respectivamente; P=0.003). Houve correlação entre os níveis pré-operatórios de MMP-9 e as concentrações teciduais de MMP-8 (P=0.042) e MMP-9 (P=0.019) entre os pacientes sintomáticos do grupo controle.Conclusão:A hidrocortisona reduz a concentração de MMP-8 na placa carotídea, em especial nos pacientes sintomáticos. Houve associação entre a inflamação sistêmica e a tecidual.

Role Of MMP-2 and MMP-9 in Resistance to Drug Therapy in Patients with Resistant Hypertension / Papel da MMP-2 e MMP-9 na Resistência à Terapia Medicamentosa em Pacientes com Hipertensão Arterial Resistente

AbstractBackground:Despite the increased evidence of the important role of matrix metalloproteinases (MMP-9 and MMP‑2) in the pathophysiology of hypertension, the profile of these molecules in resistant hypertension (RHTN) remains unknown.Objectives:To compare the plasma levels of MMP-9 and MMP-2 and of their tissue inhibitors (TIMP-1 and TIMP-2, respectively), as well as their MMP-9/TIMP-1 and MMP-2/TIMP-2 ratios, between patients with controlled RHTN (CRHTN, n=41) and uncontrolled RHTN (UCRHTN, n=35). In addition, the association of those parameters with clinical characteristics, office blood pressure (BP) and arterial stiffness (determined by pulse wave velocity) was evaluate in those subgroups.Methods:This study included 76 individuals diagnosed with RHTN and submitted to physical examination, electrocardiogram, and laboratory tests to assess biochemical parameters.Results:Similar values of MMP-9, MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, and MMP-9/TIMP-1 and MMP-2/TIMP-2 ratios were found in the UCRHTN and CRHTN subgroups (P>0.05). A significant correlation was found between diastolic BP (DBP) and MMP-9/TIMP-1 ratio (r=0.37; P=0.02) and DPB and MMP-2 (r=-0.40; P=0.02) in the UCRHTN subgroup. On the other hand, no correlation was observed in the CRHTN subgroup. Logistic regression models demonstrated that MMP-9, MMP-2, TIMP-1, TIMP-2 and their ratios were not associated with the lack of BP control.Conclusion:These findings suggest that neither MMP-2 nor MMP-9 affect BP control in RHTN subjects.

ResumoFundamento:A despeito da crescente evidência do importante papel das metaloproteinases da matriz extracelular (MMP-9 e MMP-2) na fisiopatologia da hipertensão, o perfil dessas moléculas na hipertensão arterial resistente (HAR) permanece desconhecido.Objetivo:Comparar os níveis plasmáticos de MMP-9 e MMP-2 e seus inibidores teciduais (TIMP-1 e TIMP-2, respectivamente), assim como as suas razões MMP-9/TIMP-1 e MMP-2/TIMP-2, entre pacientes com HAR controlada (HARC, n = 41) e HAR não controlada (HARNC, n = 35). Além disso, a associação desses parâmetros com as características clínicas, pressão arterial (PA) de consultório e rigidez arterial (determinada pela velocidade da onda de pulso) foi avaliada nesses subgrupos.Métodos:Este estudo incluiu 76 indivíduos com HAR submetidos a exame físico, eletrocardiografia e exames laboratoriais para a avaliação de parâmetros bioquímicos.Resultados:Valores semelhantes de MMP-9, MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, e razões MMP-9/TIMP-1 e MMP-2/TIMP-2 foram encontrados nos subgrupos HARNC e HARC (p > 0,05). Observou-se uma correlação significativa entre PA diastólica (PAD) e razão MMP-9/TIMP-1 (r = 0,37; p = 0,02) e PAD e MMP-2 (r = -0,40; p = 0,02) no subgrupo HARNC. Por outro lado, não se observou correlação no subgrupo HARC. Os modelos de regressão logística demonstraram que MMP-9, MMP-2, TIMP-1, TIMP-2 e suas razões não se associaram com a falta de controle da PA.Conclusão:Esses achados sugerem que MMP-2 e MMP-9 não afetem o controle da PA em indivíduos com HAR.

Expressions of matrix metalloproteinases-1 and -9 and opioid growth factor in rabbit cornea after lamellar keratectomy and treatment with 1% nalbuphine / Metaloproteinases de matriz 1, 9, e fator de crescimento opióide, em córneas de coelhos depois de ceratotomia e tratamento com nalbufina a 1%

ABSTRACT Purposes: To evaluate the effects of nalbuphine 1% on the expression of metalloproteinase 1 (MMP-1), metalloproteinase 9 (MMP-9), and opioid growth factor (OGF) in rabbit corneas after lamellar keratectomy. Methods: The rabbits were assigned to two groups: group nalbuphine (GN, n=30), which received 30 µL of nalbuphine 1% in 4 daily applications at regular intervals until corneal epithelialization, and group control (GC, n=30), which received physiological saline solution under the same conditions adopted in GN. The corneas were collected for immunohistochemistry on days 1, 3, 5, 7, and 9 after lamellar keratectomy, and the expressions of MMP-1, MMP-9, and OGF were analyzed. Results: The expressions of MMP-1 and MMP-9 increased until day 5 of the evaluation, with no differences observed between GN and GC (p>0.05). On days 7 and 9, significant reductions were observed in the expression of MMP-1 (p<0.01), with no differences observed between GN and GC (p>0.05). The expression of OGF was constant in all periods (p>0.05), restricted to the corneal epithelium, and there was no difference between the groups (p>0.05). Conclusions: The study results showed that nalbuphine 1% did not alter the expression patterns of MMP-1, MMP-9, and OGF in rabbit corneas after lamellar keratectomy. .

RESUMO Objetivos: Avaliar os efeitos da nalbufina 1% sobre a expressão da metaloproteinase 1 (MMP-1), da metaloproteinase 9 (MMP-9) e do fator de crescimento opióide (OGF), em córneas de coelhos submetidas à ceratectomia lamelar. Métodos: Constituíram-se dois grupos: grupo nalbufina (GN, n=30), que recebeu 30 µL de nalbufina 1% em 4 aplicações diárias, a intervalos regulares, até a epitelização corneal; controle (GC, n=30), que recebeu solução salina nas mesmas condições adotadas no GN. As córneas foram colhidas para imuno-histoquímica decorridos 1, 3, 5, 7 e 9 dias das ceratectomias lamelares, visando a se avaliarem as MMP-1, MMP-9 e OGF. Resultados: A expressão das MMP-1 e de MMP-9 se elevou até o quinto dia de avaliação, sem diferença entre GN e GC (p>0,05). Nos dias 7 e 9, observou-se redução significativa na expressão das enzimas (p<0,01), sendo que diferenças não foram observadas entre os grupos (p>0,05). O OGF exibiu imunomarcação constante em todos os períodos (p>0,05), restrita ao epitélio corneal. Não foram encontradas diferenças entre os grupos (p>0,05). Conclusões: Com base dos resultados obtidos, há como admitir que a nalbufina 1% não alterou o padrão de expressão da MMP-1, da MMP-9 e do OGF em córneas de coelhos submetidas à ceratectomia lamelar. .

Expression of matrix factors in the process of neovascularization of intervertebral disc / Expressão de fatores da matriz durante o processo de neovascularização do disco intervertebral / Expresión de factores de la matriz en el proceso de neovascularización del disco intervertebral

To investigate the effects of proteins products of endothelial cells (ECs) on the annulus fibrosus (AF) cell metabolism in an in vitro culture.

Analisar o efeito de produtos proteicos de células endoteliais (CEs) sobre o metabolismo de células de ânulo fibroso (AF) em ambiente controlado de cultura celular in vitro.

Analizar el efecto de los productos de proteína de las células endoteliales (CEs) en el metabolismo celular del anillo fibroso (AF) en sistema in vitro de cultivo controlado.

Doxiciclina em pacientes com linfangioleiomiomatose: biomarcadores e resposta funcional pulmonar / Doxycycline use in patients with lymphangioleiomyomatosis: biomarkers and pulmonary function response

OBJETIVO: Avaliar o bloqueio da metaloproteinase da matriz (MMP)-2 e da MMP-9 e a variação do VEF1 em pacientes com linfangioleiomiomatose (LAM) após o uso de doxiciclina, um conhecido inibidor de MMP, durante 12 meses. MÉTODOS: Ensaio clínico aberto de braço único no qual as pacientes com diagnóstico de LAM receberam doxiciclina (100 mg/dia) durante 12 meses. Elas foram submetidas a prova de função pulmonar completa, teste de caminhada de seis minutos, avaliação da qualidade de vida e coleta de amostras séricas e urinárias para dosagem de MMP-2, MMP-9 e VEGF-D antes do início do tratamento com doxiciclina e após 6 e 12 meses de tratamento. RESULTADOS: Trinta e uma pacientes com LAM receberam doxiciclina durante 12 meses. Embora tenha havido um bloqueio efetivo da MMP-9 urinária e da MMP-2 sérica após o tratamento, os níveis séricos de MMP-9 e VEGF-D permaneceram estáveis. Com base na resposta à doxiciclina (determinada pela variação do VEF1), as pacientes foram divididas em dois grupos: respondedoras (doxi-R; n = 13) e não respondedoras (doxi-NR; n = 18). As pacientes com alterações espirométricas leves apresentaram melhor resposta à doxiciclina. Os efeitos colaterais mais comuns foram epigastralgia, náusea e diarreia, todos de leve intensidade. CONCLUSÕES: Em pacientes com LAM, o tratamento com doxiciclina resulta em um bloqueio eficaz das MMP, além de melhorar a função pulmonar e a qualidade de vida daqueles com doença menos grave. No entanto, esses benefícios não parecem estar relacionados ao bloqueio das MMP, o que sugere um mecanismo de ação diferente. (Registro Brasileiro de Ensaios Clínicos - ReBEC; número de identificação RBR-6g8yz9 [http://www.ensaiosclinicos.gov.br]).

OBJECTIVE: To assess blockade of matrix metalloproteinase (MMP)-2 and MMP-9, as well as the variation in FEV1, in patients with lymphangioleiomyomatosis (LAM) treated with doxycycline (a known MMP inhibitor) for 12 months. METHODS: An open-label, single-arm, interventional clinical trial in which LAM patients received doxycycline (100 mg/day) for 12 months. Patients underwent full pulmonary function testing, a six-minute walk test, and quality of life assessment, as well as blood and urine sampling for quantification of MMP-2, MMP-9, and VEGF-D levels-at baseline, as well as at 6 and 12 months after the initiation of doxycycline. RESULTS: Thirty-one LAM patients received doxycycline for 12 months. Although there was effective blockade of urinary MMP-9 and serum MMP-2 after treatment, there were no significant differences between pre- and post-doxycycline serum levels of MMP-9 and VEGF-D. On the basis of their response to doxycycline (as determined by the variation in FEV1), the patients were divided into two groups: the doxycycline-responder (doxy-R) group (n = 13); and the doxycycline-nonresponder (doxy-NR) group (n = 18). The patients with mild spirometric abnormalities responded better to doxycycline. The most common side effects were mild epigastric pain, nausea, and diarrhea. CONCLUSIONS: In patients with LAM, doxycycline treatment results in effective MMP blockade, as well as in improved lung function and quality of life in those with less severe disease. However, these benefits do not seem to be related to the MMP blockade, raising the hypothesis that there is a different mechanism of action. (Brazilian Registry of Clinical Trials - ReBEC; identification number RBR-6g8yz9 [http://www.ensaiosclinicos.gov.br]).

Citotoxicidade transdentinária e efeito da carbodiimida (EDC) na biomodificação do colágeno dentinário e na degradação da interface adesiva / Trandentinal cytotoxicity and effect of carbodiimide (EDC) on dentin collagen biomodification and adhesive interface degradation

O objetivo geral deste trabalho foi avaliar a citotoxicidade transdentinária da carbodiimida (EDC), bem como sua influência na degradação do colágeno dentinário e na estabilidade da união resina-dentina. No estudo 1, células MDPC23 foram plantadas na superfície pulpar de discos de dentina e a superfície oclusal foi tratada por 60s com uma das seguintes soluções: sem tratamento; EDC 0,1M; 0,3M ou 0,5M; glutaraldeído 5% (GA); tampão Sorensen ou H2O2 29%. A viabilidade e a morfologia celular foram analisadas pelos testes de MTT, Live/dead, produção de proteína total (PT), de colágeno e MEV. Os dados foram analisados pelos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney (p<0,05). O GA promoveu aumento do metabolismo celular. A morte por necrose e a morfologia celular não foram influenciadas pelos agentes cross-linkers. Não houve redução na produção de PT e colágeno após 7 dias. Para o estudo 2, espécimes de dentina foram completamente desmineralizados e a variação do módulo de elasticidade (E), inibição de MMP, perda de massa, liberação de hidroxiprolina (HYP) e degradação térmica do colágeno (DTC) foram analisados após tratamento com uma das seguintes soluções por 30s ou 60s: água deionizada (controle); EDC 0,5M; EDC 1M; EDC 2M e GA 10%. Os dados referentes ao E, atividade de MMP e liberação de HYP foram submetidos aos testes de Wilcoxon e KruskalWallis ou Mann-Whitney. Os valores de perda de massa e DT foram analisados pelos testes de ANOVA e Tukey (p<0,05). Os melhores resultados quanto ao E foram observados para o GA. Todos os cross-linkers reduziram a atividade de MMP e a liberação de HYP e aumentaram a temperatura de DT do colágeno. No estudo 3, sessenta palitos de dentina foram divididos em 6 grupos de acordo com a solução de tratamento: água deionizada (controle); EDC 0,1M; EDC 0,5M; EDC 0,5M + HEMA 35%; proantocianidina 5% (PA) ou clorexidina (CHX) 2%. Após condicionamento ácido os palitos foram tratados por 60s. A atividade de MMP foi analisada por ensaio colorimétrico. Os dados expressos em valores de absorbância e em equivalentes a atividade de MMP-9 foram submetidos aos testes de Kruskall-Wallis e Mann-Whitney (p<0.05). Todas as soluções inibiram a atividade de MMP. O EDC 0,5M e sua mistura com HEMA obtiveram os melhores resultados. Finalmente, no estudo 4, superfícies planas de dentina foram condicionadas e tratadas por 30 ou 60s com solução de EDC 0,5M ou água deionizada. Após o tratamento, o adesivo Single Bond 2 (SB2) foi aplicado e as coroas reconstruídas em resina composta. Espécimes foram produzidos e submetidos aos testes de microtração e nanoinfiltração após 24h, 6 ou 12 meses em saliva artificial. Os testes de ANOVA e Tukey (p<0.05) foram aplicados. O tratamento da dentina com EDC preveniu a redução da RU e o aumento da nanoinfiltração após 12 meses de armazenamento. Desta forma, pôde ser concluído que o pré-tratamento da dentina com agentes cross-linkers não exerceu efeito citotóxico trandentinário sobre células odontoblastóides, favoreceu as propriedades mecânicas do colágeno, foi capaz de inibir MMPs e prevenir a degradação da interface adesiva

The purpose of this study was to evaluate the trandentinal cytotoxicity of carbodiimide (EDC), as well as its influence on dentinal collagen degradation and stability of resin-dentin bonds. In the first experiment, MDPC-23 cells were seeded on the pulp surface of the disks and one of the following solutions was applied on the occlusal surface for 60s: no treatment (negative control), 0.1M, 0.3M or 0.5M EDC; 5% glutaraldehyde (GA); Sorensen buffer or 29% hydrogen peroxide (positive control). Cell viability and morphology were analyzed by MTT, Live/Dead assays, total protein (TP) and collagen production and SEM. Data were analyzed by Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests (p<0.05). Only GA increased cellular metabolism. Cell death by necrosis and cell morphology were not affected by the cross-linker agents. There was no reduction in TP and collagen production after 7 days. For the second experiment, dentin beams were completely demineralized and the variation in elastic modulus (E), MMP activity, dry mass loss, hydroxyproline release (HYP) and collagen thermal degradation (CTD) were analyzed after the dentin treatment for 30s or 60s with the following solutions: water; 0.5M; 1M or 2M EDC and 10% GA. Data from E and MMP activity and HYP release were submitted to Wilcoxon and Kruskal-Wallis or Mann-Whitney tests. Dry mass loss and CTD data were analyzed by ANOVA and Tukey's tests (p>0.05). GA group obtained the highest E values. All cross-linking agents decreased MMP activity and HYP release and increased CTD. In the third experiment, sixty dentin beams were randomly divided into 6 groups according to the treatment solution: deionized water (control), 0.1M EDC, 0.5M EDC, 0.5M EDC+35% HEMA, 5% proanthocyanidin (PA) or 2% chlorhexidine (CHX). The beams were acid etched and treated for 60s. The total MMP activity was analyzed by a colorimetric assay (Sensolyte®). Data were expressed as absorbance values at 412nm and MMP-9 equivalents and subjected to Kruskal-Wallis and MannWhitney tests (p<0.05). All cross-liking solutions inhibited MMPs. The 0.5 M EDC solution and its mixture with HEMA had the highest inhibition values. Finally, in experiment 4, flat dentin surfaces were etched and treated for 30 or 60s with 0.5M EDC or deionized water. After treatment, Single Bond 2 (SB2) was applied and the crowns were reconstructed with composite resin. Dentin specimens were produced and submitted to microtensile and nanoleakage tests after 24h, 6 or 12 months in artificial saliva. Bond strength (BS) data (MPa) were analyzed by ANOVA and Tukey tests (p<0.05). The dentin treatment with EDC did not affect SB2 immediate BS and prevented the degradation of the adhesive interface, even after 12 months of saliva storage. Thus, the dentin treatment with cross-linking agents did not exert transdentinal cytotoxic effects on odontoblastlike cells, increased collagen mechanical properties, was able to inhibit MMPs and prevent the degradation of the adhesive interface

O uso da doxiciclina em dose subantimicrobiana em pacientes com doença periodontal: uma revisão de literatura / The use of subantimicrobial dose doxycycline in patients with periodontal disease: a review

A Periodontite Crônica é uma doença imunoinflamatória caracterizada pela perda óssea alveolar em indivíduos susceptíveis, tendo como fator etiológico principal o biofilme dental. O tratamento convencional desta doença é a terapia periodontal mecânica. Na tentativa de melhorar os parâmetros clínicos no controle da periodontite, a terapia de modulação do hospedeiro pode ser usada como auxiliar ao tratamento convencional, uma vez que diminui a resposta inflamatória do paciente, tendo em vista que as metaloproteinases da matriz têm um papel importante na regulação da destruição do tecido periodontal. Tal terapia pode ser realizada com doxiciclina em dose subantimicrobiana (DDS) de 20 mg administrada 2 vezes ao dia, para regular a atividade excessiva de colagenase no tecido gengival e fluido gengival crevicular. Dessa maneira, o presente estudo teve como objetivo avaliar o mecanismo de ação dessa droga, a eficácia do tratamento e a segurança no seu uso em longo prazo. Os dados obtidos a partir da revisão de literatura demonstram que a DDS como coadjuvante a raspagem e alisamento radicular (RAR) foi capaz de promover benefícios clínicos significativos, reduzir os níveis de colagenase, marcadores inflamatórios, reabsorção óssea e citocinas pró-inflamatórias, além de não alterar a microflora subgengival e não causar resistência a antibióticos. Os resultados sugerem ser eficaz e seguro o uso da DDS em longo prazo como coadjuvante na terapia periodontal quando usada por no mínimo 3 meses, com melhores resultados em 9 meses de uso. Futuros estudos longitudinais necessitam ser conduzidos a fim de definir a eficácia desse tratamento na história da doença periodontal.

The Chronic Periodontitis is an immuno-inflammatory disease characterized by alveolar bone loss in susceptible individuals, with the dental biofilm as main etiological factor. Conventional treatment of this disease is mechanical periodontal therapy. In an attempt to improve the clinical parameters in controlling periodontitis, host modulation therapy can be used as an adjunct to conventional treatment, since it reduces the inflammatory response of the patient, considering that matrix metalloproteinases have a role in regulation of periodontal tissue destruction. Such therapy can be accomplished with subantimicrobial dose doxycycline (SDD) 20 mg taken twice daily to regulate the excessive collagenase activity in gingival tissue and gingival crevicular fluid. Thus, the present study aimed to evaluate the mechanism of action of this drug, treatment efficacy and safety as long-term use treatment. The data obtained from the literature review shows that the SDD as an adjunct to scaling and root planing (SRP) was able to promote significant clinical benefits, reducing levels of collagenase, inflammatory markers, bone resorption and proinflammatory cytokines, and does not lead to change the subgingival microflora and antibiotic resistance. The results suggest that it is effective and safe the long-term use of SDD as an adjunct in periodontal therapy when used for at least 3 months, with better results at 9 months of use. Future longitudinal studies need to be conducted to establish the efficacy of this treatment in the history of periodontal disease.

Polimorfismos genéticos e endometriose: a contribuição dos genes que regulam a função vascular e o remodelamento de tecidos / Genetic polymorphisms and endometriosis: contribution of genes that regulate vascular function and tissue remodeling

A endometriose é uma doença ginecológica benigna caracterizada pela presença e crescimento de células endometriais fora do útero. Fatores genéticos, endócrinos, imunológicos e ambientais têm sido sugeridos em sua patogênese. Um grande número de estudos tem relacionado polimorfismos genéticos como um fator que contribui para o desenvolvimento da endometriose. Nesta revisão, apresentamos uma descrição detalhada da contribuição de polimorfismos genéticos nos genes que regulam a função vascular e o remodelamento do tecido em endometriose (AHSG, EGFR, EGF, VEGF, endostatina, PAI-1, ACE e MMPs). Alguns polimorfismos dos genes VEGF (-460 C/T, +405 G/C, +936 C/T), PAI, MMP-1, 2 e 3 foram amplamente estudados, enquanto outros dos genes AHSG, EGF, endostatina e VEGF (-1154 G/A, -2578 A/C), não. Nesse último caso, estudos adicionais tornam-se necessários para confirmar os achados encontrados pelos poucos trabalhos que analisaram esses polimorfismos de único nucleotídeo (SNP). Além disso, os estudos que encontraram associação positiva ou negativa do SNP com endometriose enfatizam a importância de estudos com grande número de casos-controles para confirmar os achados por eles publicados. A análise por haplótipo foi realizada apenas para os genes VEGF (-460, +405, -1154 e -2578), ACE (-240/2350) e MMP-1, 2, 3 e 9, e, na maioria deles, não houve associação com endometriose. Dos oito trabalhos que analisaram haplótipos do gene VEGF, cinco deles não os associaram à endometriose. Os haplótipos dos genes ACE e MMP-2 não foram associados à endometriose, enquanto aqueles dos genes MMP-1, 3 e 9 foram relacionados a risco elevado da doença.

Endometriosis is a benign gynecological disease characterized by the presence and growth of endometrial cells outside the uterus. Genetic, endocrine, immunological, and environmental factors have been suggested in its pathogenesis. A great number of studies have related genetic polymorphisms as a factor that contributes to the development of endometriosis. This review presents a detailed description of the contribution of genetic polymorphisms in genes that regulate vascular function and tissue remodeling in endometriosis (alpha 2-HS glycoprotein [AHSG], epidermal growth factor receptor [EGFR], vascular endothelial growth factor [VEGF], endostatin, plasminogen activator inhibitor 1 [PAI-1], angiotensin I-converting enzyme [ACE], and matrix metalloproteinases [MMPs]). Some polymorphisms of the VEGF (-460 C/T, +405 G/C, +936 C/T), PAI, MMP-1, 2, and 3 genes were widely studied, while polymorphisms of the AHSG, EGF, endostatin, and VEGF (-1154 G/A, -2578 A/C) genes were not. In this latter case, additional studies are required to confirm the findings of the few studies that have analyzed these single nucleotide polymorphisms (SNPs). Additionally, studies that found a positive or negative association of SNP with endometriosis emphasize the relevance of studies with a large number of control cases to confirm their findings. The haplotype analysis was performed only for the VEGF (-460, +405, -1154 and -2578), ACE (-240/2350) and MMP-1, 2, 3, and 9 genes, and in most of them, there was no association with endometriosis. Of the eight works that analyzed haplotypes of the VEGF gene, five did not associate them with endometriosis. Haplotypes of ACE and MMP-2 genes were not associated with endometriosis, while those of MMP-1, 3, and 9 genes were related to a high risk for the disease.

Expressão de MMPs, marcadores angiogênicos e proliferação celular em tumores odontogênicos / Expression of MMPs, angiogenic and proliferation cell markers in odontogenic tumors

INTRODUÇÃO E OBJETIVO: O conhecimento do comportamento biológico de lesões de natureza odontogênica é essencial para tornar a abordagem terapêutica adequada e estabelecer um prognóstico. A produção de metaloproteinases da matriz extracelular (MMPs), a angiogênese e a proliferação celular fornecem subsídios para o crescimento tumoral. O presente artigo tem como objetivo fazer uma revisão de literatura de pesquisas em tumores odontogênicos (TOs) selecionados a partir da nova classificação da Organização Mundial da Saúde (OMS) de 2005 sobre a expressão de MMPs, marcadores angiogênicos e proliferação celular e verificar, nestes estudos, a relação desses marcadores quanto ao comportamento biológico dessas lesões. RESULTADOS: Nota-se que as MMPs -1, -2, -7, -9 e -26 encontram-se mais expressas no componente epitelial e estroma e, particularmente, a -13 em estroma. Uma maior angiogênese é observada em TOs mais agressivos. CD 105 foi mais expresso no TO ceratocístico (TOC) e CD34 em ameloblastomas sólidos (ASs). Relata-se elevada expressão do Ki-67 e p53 no TOC e no AS e baixo índice de proliferação celular no TO adenomatoide (TOA). CONCLUSÃO: Esses resultados mostram que as MMPs participam no processo de invasão e recorrência de algumas lesões odontogênicas, estando associadas ao comportamento biológico desses tumores. A angiogênese é fundamental para fornecer suporte à proliferação celular e esses dois eventos em conjunto estão correlacionados com diferentes níveis de comportamento biológico nos TOs, quando comparados com cistos de natureza odontogênica, o que pode sugerir o uso de inibidores angiogênicos como provável abordagem terapêutica nessas lesões.

INTRODUCTION AND OBJECTIVE: The study of biological behavior of odontogenic lesions is essential to the establishment of appropriate therapeutic approach and prognosis. The production of extracellular matrix metalloproteinases (MMPs), angiogenesis and cell proliferation contribute to tumor growth. This paper aims to review the literature on odontogenic tumors (OT) selected according to the new World Health Organization classification (WHO- 2005) by evaluating the expression of MMPs, angiogenic and cell proliferation. Furthermore, it aims to verify the relation between these markers and the biological behavior of these lesions. RESULTS: it was found that MMPs -1, -2, -7, -9 and -26 had a higher expression in both epithelial component and stroma, and 13 particularly in the stroma. Increased angiogenesis was observed in more aggressive OT. CD105 expression was higher in keratocystic odontogenic tumour (KOT) and CD34 in solid ameloblastomas (SA). It was observed a higher expression of Ki-67 and p53 in SA and KOT and a low cell proliferation rate in the adenomatoid odontogenic tumour (AOT). CONCLUSION: These results show that MMPs are involved in invasion and recurrence of some odontogenic lesions and are associated with the biological behavior of these tumors. Angiogenesis is critical to provide support to cell proliferation and these concomitant events are correlated with different levels of biological behavior in OT when compared to odontogenic cysts, hence the use of angiogenic inhibitors may be a potential therapeutic approach in these lesions.

Avaliação da expressão gênica de metaloproteinases de matriz e seus inibidores em colesteatomas por amplificação de ácidos nucleicos / Cholesteatoma gene expression of matrix metalloproteinases and their inhibitors by RT-PCR

O colesteatoma adquirido da orelha média é uma lesão epitelial escamosa queratinizante e hiperproliferativa benigna que pode resultar na destruição das estruturas ósseas circunvizinhas do osso temporal. Estudos recentes demonstram que alterações na produção celular de metaloproteinases de matriz (MMPs) e seus inibidores específicos (TIMPs) contribuem para a fisiopatologia do colesteatoma. OBJETIVO: Verificar a aplicabilidade da amplificação de RNA para avaliação da expressão de isoformas de MMPs e TIMPS em colesteatomas para correlação com a agressividade da doença. MATERIAIS E MÉTODOS: Estudo prospectivo. Dezenove casos de colesteatomas em diferentes estágios de evolução foram selecionados. RNA extraído das biópsias foi submetido à transcrição reversa - reação da polimerase em cadeia (RT-PCR) para amplificação semiquantitativa de MMP2, MMP3, MMP9, MMP13 e TIMP1. Resultados: Seis colesteatomas apresentaram reação positiva para pelo menos um dos genes estudados. Quatro amostras amplificaram apenas um gene (MMP2 ou MM13) e duas amostras amplificaram três genes (MMP2, TIMP1 e MMP3 ou MMP13). Nenhuma amostra amplificou MMP9. CONCLUSÃO: A avaliação da expressão gênica de MMPs e TIMPs em colesteatomas pode ser realizada por RT-PCR, apesar de dificuldades técnicas. Não foi possível realizar associação entre o perfil de expressão gênica e a agressividade da doença.

Acquired middle ear cholesteatoma is a benign keratinizing hyperproliferative squamous epithelial lesion that may result in the destruction of the bone structures surrounding the temporal bone. Recent studies show that variations in cellular production of matrix metalloproteinases (MMPs) and their specific inhibitors (TIMPs) contribute to the pathophysiology of cholesteatoma. OBJECTIVE: This study aims to analyze the use of RNA amplification tests to evaluate the expression of MMP and TIMP isoforms in cholesteatomas and their correlation with disease severity. MATERIALS AND METHODS: This is a prospective study. Nineteen cholesteatoma cases at different stages were selected. RNA collected from biopsy specimens was submitted to reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) for semiquantitative amplification of MMP2, MMP3, MMP9, MMP13 and TIMP1. RESULTS: Six cholesteatomas were positive for at least one of the studied genes. Four samples amplified a single gene (MMP2 or MMP13) and two samples amplified three genes (MMP2, TIMP1 and MMP3 or MMP13). No sample amplified MMP9. CONCLUSION: RT-PCR can be used to assess MMP and TIMP gene expression in cholesteatomas despite technical difficulties. Gene expression profiles could not be related to disease severity.